Методические рекомендации БиоЛаТ
Методические рекомендации БиоЛаТ
Методические рекомендации
Одобрены на совместном заседании Отделения ветиринарной медицины РАСХН и Ученого совета ГНУ ВНИИВСГЭ «22» сентября 2009 г., протокол № 3
Утверждены Оделением ветиринарной медицины РАСХН
Авторы: д.в.н., проф. Долгов В.А., д.б.н. Лавина С.А., к.б.н. Арно Т.С., к.б.н. Семенова Е.А., к.б.н. Островская А.В., Самохин И.В. (ГНУ ВНИИВСГЭ), к.т.н. доц., Черемных Е.Г., к.х.н., доц. Симбирева Е.И., Кулёшин А. В. (МГУПБ).
Полное наименование: Автоматизированный метод оценки токсичности продуктов животноводства, кормов и объектов окружающей среды на инфузориях Paramecium Caudatum и Tetrahymena Pyriformis.
Дата издания: 2009 г.
Время проведения теста:
- Первый этап: 2 часа на инфузориях Paramecium caudatum;
- Второй этап: 72 часа на инфузориях Tetrahymena pyriformis.
Тест функция: Коэффициент прироста или смертности тест-объектов.
Критерии токсичности:
- Для первого этапа: смертность 50% и более инфузорий Paramecium caudatum в течение 2-х часов в водном или ацетоновом экстракте.
- Для второго этапа: коэффициент прироста инфузорий Tetrahymena pyriformis за 24 часа экспозиции ≤ 0,5.
Назначение и область применения методики:
Методические рекомендации предназначены для ускоренной оценки токсичности:
- продуктов животного происхождения:
- - мясо и мясопродукты,
- - молоко и молокопродукты,
- - яйца,
- - рыба и рыбопродукты;
- - зерно фуражное и продукты его переработки,
- - комбикорма,
- - мясокостная и рыбная мука,
- - жмыхи, шроты,
- - дрожжи кормовые,
- - различные кормовые добавки и др.;
- - вода,
- - почва,
- - полимерные и строительные материалы,
- - воздух,
- - органические отходы сельскохозяйственных предприятий.
Описание методики:
Оценка токсичности указанных объектов осуществляется с помощью метода, состоящего из одного, двух и трех последовательных этапов:
- на первом этапе оценивают выживаемость в течение 2-х часов инфузорий Paramecium caudatum в водных экстрактах и водных растворах ацетоновых экстрактов исследуемых объектов, по результатам первого этапа оценивают токсичность исследуемого объекта или принимают решение о продолжении исследования на втором этапе;
- на втором этапе продолжают экспозицию инфузорий Tetrahymena pyriformis в пробах исследуемых объектов в течение 72 часов (при отсутствии выраженного загрязнения среды посторонней микрофлорой), по результатам всех трех этапов оценивают токсичность исследуемых объектов или принимают решение о продолжении исследования иными методами.
Принцип уточняющей оценки с увеличением времени экспозиции является надежной основой для выявления низких концентраций токсикантов, а использование максимально стандартизованной культуры инфузорий Tetrahymena pyriformis позволяет получать удовлетворяющие требованиям достоверности и сопоставимости результаты. На всех трех этапах результаты вычисляются на основе подсчета живых клеток простейших с помощью прибора для биологических исследований БиоЛаТ-3. Вывод о степени токсичности исследуемого объекта производится автоматически в соответствии с полученными результатами по критериям, представленным в разделе "критерии токсичности".
Оборудование и материалы:
- Прибор БиоЛаТ-3, компьютер с программой AutoCiliataXP;
- инфузории Paramecium caudatum, концентрация которых не менее 500±100 клеток/мл в чашке Петри;
- инфузории Tetrahymena pyriformis, концентрация которых не менее 50000±1000клеток/мл в пробирке;
- Микроскоп МБС-10;
- весы лабораторные с погрешностью взвешивания не более 0,1г;
- дистиллятор;
- шкаф сушильный электрический лабораторный;
- мельница лабораторная электрическая;
- аппарат для встряхивания (шуттель-аппарат);
- центрифуга лабораторная;
- гомогенизатор;
- спиртовка стеклянная лабораторная по ГОСТ 25336;
- петля бактериологическая;
- пробирки стеклянные бактериологические по ГОСТ 25336;
- вата медицинская гигроскопическая по ГОСТ 5556;
- вода дистиллированная по ГОСТ 6709;
- колбы стеклянные лабораторные по ГОСТ 25336;
- чашки Петри диам. 100 мм по ГОСТ 25336-82;
- шприцы медицинские одноразовые 2см3.
- ацетон по ГОСТ 2603-79;
- натрий хлористый по ГОСТ 4233;
- магний сернокислый 7-ми водный по ГОСТ 4523-77;
- натрий углекислый кислый по ГОСТ 4201-79;
- кальций хлористый 2-х водный по ГОСТ4261-78;
- калий хлористый по ГОСТ 4234-77;
- натрий фосфорнокислый однозамещенный;
- дрожжи сухие по ГОСТ 28483-90;
- пептон сухой для бактериологических целей по ГОСТ 13805;
- экстракт дрожжевой по ТУ 6-09-3462-73;
- глюкоза кристаллическая гидратная по ГОСТ 975.
